磁珠分选细胞
Biolegend Mojosort™ 磁性细胞分选年度大促销
MojoSort™ Mouse anti-APC Nanobeads Protocol
MojoSort™ Mouse anti-APC Nanobeads
10 µl Mouse Anti-APC Nanobeads for 1x10^7^ cells in 100 µl of buffer.
This procedure is optimized for the isolation of 10 ^7^ to 2 x 10^8^cells per tube.
1.在不裂解红细胞的情况下从您感兴趣的组织或血液中制备细胞。
2.在样品制备的最后一次清洗中，通过在 5 mL（12 x 75 毫米）聚丙烯管中添加最多 4 mL，将细胞重悬于 MojoSort™ 缓冲液中。 注意： 在整个过程中将 MojoSort™ 缓冲液置于冰上。
3.用 70µm 细胞滤网过滤细胞，以 300xg 离心 5 分钟，然后重悬于适当体积的 MojoSort™ 缓冲液中。计数并调整细胞浓度至 1 x 10 ^8^个细胞/mL。
4.将 100µL 细胞悬浮液（10 ^7^ 个细胞）等分到新试管中。检查抗体技术数据表中指示的 APC 偶联抗体的流式细胞术染色的推荐用法。计算染色 10^7^ 个细胞（或所需细胞数量）的体积。向细胞悬液中加入适量的 APC 偶联抗体，混匀，冰上孵育 15 分钟。 100uL里 10 ^7^ 个细胞，加入1uL CD8-APC，建议有3管，一管染CD8-APC但不磁珠分选；一管染CD8-APC，但磁珠分选；一管不染色，不分选 可选：在添加抗体之前取等分试样以监测纯度和产量。
5. 加入最多 4mL 的 MojoSort™ 缓冲液清洗细胞。以 300xg 离心细胞 5 分钟 。
6. 弃去上清液并重悬于 100µL MojoSort™ 缓冲液中。
7. 通过涡旋、最大速度、5 次接触重悬珠子。添加 10µL APC 纳米珠。 充分混合并 在冰上孵育 15 分钟 。如果分离更多的细胞，相应地扩大体积。例如，在 1 ml MojoSort™ 缓冲液中加入 100 µL Nanobeads 以分离 1 x 10 ^8^个细胞。 当使用少于 10 *^7^ 个 细胞时，使用 10 ^7^ 个细胞的指示 体积*。
8. 加入最多 4mL 的 MojoSort™ 缓冲液清洗细胞。以 300xg 离心细胞 5 分钟 。
9. 丢弃上清液。
10. 添加 2.5mL 的 MojoSort™ 缓冲液。
注意： 如果您观察到聚集体，请过滤悬浮液。为了最大限度地提高产量，您可以通过上下移液来破坏聚集体。
11.将试管放入磁铁中 5 分钟。 可选：在将管子放入磁铁之前取少量等分试样以监测纯度和产量。如果需要，保留未使用的单元格用作控件或其他应用程序。
12. 倒出未标记的部分。如果这些是您感兴趣的细胞 （阴选的时候） ，请 不要丢弃 **。在 2.5mL MojoSort™ 缓冲液中重悬标记的细胞。
13.对标记的分数 重复步骤 10-12 两次 ， 总共进行 3 次分离 。 汇集未标记的分数并保留标记的细胞。不感兴趣的部分可用作染色控制、监测纯度/产量或其他目的。
可选：取少量等分试样以监测纯度和产量
后续3管：染CD8-APC并磁珠分选 染CD8-APC 未磁珠分选 未染CD8未磁珠分选，继续流式检测验证
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